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【摘要】：【目的】研讨酚氧化酶(phenoloxidase,PO)在德国小蠊Blattella germanica对大肠杆菌Escherichia coli的免疫响应中的影响。【措施】利用同源克隆和RACE措施获得德国小蠊酚氧化酶基因(Bg PO)的全长c DNA序列,用MEGA5.1软件构建Bg PO与其他昆虫PO的系统进化树,用RT-PCR措施检测Bg PO的组织表达模式及大肠杆菌诱导后不同时间的表达量变化,用Hultmark措施测定抑菌活力,用邻苯二酚法测定酚氧化酶活性。【结果】获得的德国小蠊Bg PO基因(Gen Bank登录号:KJ789157)c DNA全长为2 252 bp,其中开放阅读框大小为2 085 bp,编码695个氨基酸,预测的分子量和等电点分别为79.7 k Da和6.19。Blast略论结果表明德国小蠊Bg PO与其他昆虫PO有较高的同源性,其中与白蚁Coptotermes formosanus PO的氨基酸序列一致性高达80%;系统进化树略论显示其与C.formosanus PO的亲缘关系最近。基因表达检测结果表明Bg PO主要在血淋巴细胞和表皮中表达。大肠杆菌诱导德国小蠊后,发现Bg PO的表达量在诱导24 h后升高,在诱导后36 h达到峰值;其血淋巴的抑菌活力及酚氧化酶的活性在诱导后6-36 h内均随着诱导时间的增加而增加,且菌诱导组与PBS诱导组之间存在显著异同(P0.05)。【结论】本探讨获得的德国小蠊酚氧化酶基因Bg PO主要在血淋巴和表皮中表达,并参与了大肠杆菌诱导的免疫应答反应。探讨结果为进一步探究酚氧化酶在德国小蠊对病原菌的免疫响应机制奠定基础。
【作者单位】：
遵义师范学院生命科学学院 赤水河流域动物资源保护与运用探讨重点实验室;遵义医学院生物化学与分子生物学教研室; 昆虫具备较强的先天免疫系统,使其能够通过各种免疫反应保卫自己免受外源入侵物之害(Hoffmann and Reichhart,2002)。目前关于昆虫中免疫蛋白、免疫相关通路、抗菌肽的探讨也越来越多,但主要集中在黑腹果蝇Drosophila melanogaster、家蚕Bombyx mori等模式昆虫中(Ganesan et a ，德语论文题目，德语论文题目 |
