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【摘要】：本文以落叶松木屑为原料,对落叶松阿拉伯半乳聚糖的提取、分离纯化、部分理化性质与结构及其体外抗氧化性进行了探讨,为其进一步开发利用奠定基础。
采用水提醇沉法提取阿拉伯半乳聚糖,通过单因素和正交试验,确定了最优提取工艺条件为：原料粒度40-60目,浸提温度70℃,浸提时间2h,料液比1：10,浸提2次；最适醇沉工艺条件为：提取液浓缩比5：1,醇沉时间20h,醇沉乙醇终浓度70%。在此工艺条件下,阿拉伯半乳聚糖得率为8.40%。
采用石灰法脱蛋白和活性炭脱色对粗多糖进行纯化。确定石灰法脱蛋白的最佳工艺条件为：添加0.04%的氢氧化钙,70℃下保温40min,蛋白质去除率可达96.80%；活性炭脱色最佳工艺条件为：脱色温度40℃,脱色时间20min,活性炭用量1.0%,脱色率为40.10%。
比较探讨了10种树脂的脱色和脱蛋白效果,最终选择了聚酰胺树脂。添加5.0%的聚酰胺树脂,静态吸附12h,脱色率为64.87%,蛋白质去除率为85.38%,阿拉伯半乳聚糖损失率为7.97%。
通过DEAE-纤维素(OH-)色谱柱对除杂后的多糖进行分级纯化,得到2种多糖组分,即蒸馏水洗脱峰(LAG-1)和0.05mol/LNaCl溶液洗脱峰(LAG-2)。LAG-1与LAG-2分别通过Sephadex G-75疑胶色谱柱分离纯化,得到LAG-1a、LAG-1b和LAG-2a。LAG-1b经过高效凝胶渗透色谱得到单一对称峰,为均一组分,重均分子量为21021Da。
理化性质探讨结果显示,LAG-1a、LAG-1b、LAG-2a均易溶于冷水、稀碱,其水溶液透明；不溶于无水乙醇、丙酮等有机溶剂；不含还原糖、淀粉、游离蛋白质、酚类等杂质。气相色谱测得LAG-1a、LAG-1b、LAG-2a均主要由阿拉伯糖和半乳糖组成。紫外光谱测定结果表明LAG-1a、LAG-1b、LAG-2a中均不含核酸和蛋白质。红外光谱测定结果表明LAG-1a、LAG-1b、LAG-2a均具有多糖的特征吸收峰,并且其糖环为吡喃环,且其糖环均以β-糖苷键连接。碘-碘化钾实验结果表明,LAG-1a、 LAG-1b、AG-2a都可能存在较长的侧链和较多的分枝。刚果红实验结果表明,LAG-1a和LAG-1b具有有序的三股螺旋结构,LAG-2a不具有三股螺旋结构。
体外抗氧化性探讨结果表明,随着多糖浓度的增加,LAG-1与LAG-2的还原力及清除羟自由基和DPPH自由基的能力逐渐增强,且在同等浓度下,LAG-2的抗氧化活性强于LAG-1。
【关键词】：落叶松木屑 阿拉伯半乳聚糖 提取 纯化 理化性质 抗氧化性
摘要4-5 ABSTRACT5-7 目录7-10 1 前言10-21 1.1 多糖的探讨概述10-14 1.1.1 多糖的定义、来源及分类10 1.1.2 多糖的提取与分离10 1.1.3 多糖的除杂10-12 1.1.4 多糖的分级纯化12-13 1.1.5 多糖的纯度鉴定与分子量的测定13 1.1.6 多糖的结构及结构与活性的关系13-14 1.2 落叶松阿拉伯半乳聚糖的探讨概述14-19 1.2.1 阿拉伯半乳聚糖的分布14-15 1.2.2 阿拉伯半乳聚糖的理化性质与结构15 1.2.3 阿拉伯半乳聚糖的功能15-17 1.2.4 阿拉伯半乳聚糖的运用17-18 1.2.5 阿拉伯半乳聚糖的国内外探讨状况18-19 1.3 课题探讨目的与意义19 1.4 课题探讨内容19-21 2 材料与措施21-38 2.1 实验材料21-23 2.1.1 原料21 2.1.2 主要试剂21-22 2.1.3 主要仪器与设备22-23 2.2 实验措施23-38 2.2.1 落叶松木屑基本成分略论23-26 2.2.2 落叶松阿拉伯半乳聚糖的提取工艺26-27 2.2.3 落叶松阿拉伯半乳聚糖的醇沉工艺27 2.2.4 粗阿拉伯半乳聚糖脱蛋白工艺27-29 2.2.5 粗阿拉伯半乳聚糖的活性炭脱色工艺29-30 2.2.6 大孔吸附树脂和聚酰胺树脂静态吸附30-31 2.2.7 阿拉伯半乳聚糖的色谱柱纯化工艺31-33 2.2.8 阿拉伯半乳聚糖分子量的测定33 2.2.9 阿拉伯半乳聚糖的部分理化性质测定33-34 2.2.10 阿拉伯半乳聚糖的结构略论34-35 2.2.11 阿拉伯半乳聚糖的体外抗氧化性探讨35-38 3 结果与讨论38-70 3.1 原料基本成分略论38 3.2 DNS法测定还原糖含量38 3.3 苯酚-硫酸法测定总糖含量38-39 3.4 落叶松阿拉伯半乳聚糖的提取工艺39-43 3.4.1 落叶松阿拉伯半乳聚糖提取单因素试验39-42 3.4.2 落叶松阿拉伯半乳聚糖提取正交试验42-43 3.5 落叶松阿拉伯半乳聚糖的醇沉工艺43-44 3.5.1 单因素试验43-44 3.6 粗阿拉伯半乳聚糖脱蛋白工艺44-47 3.6.1 不同措施脱蛋白效果的比较44-45 3.6.2 石灰法脱蛋白单因素试验45-47 3.6.3 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量47 3.7 粗阿拉伯半乳聚糖活性炭脱色工艺47-51 3.7.1 活性炭脱色单因素试验47-50 3.7.2 活性炭脱色正交试验50-51 3.8 大孔吸附树脂和聚酰胺树脂静态吸附脱色与脱蛋白效果51-52 3.8.1 大孔吸附树脂和聚酰胺树脂的静态吸附比较51-52 3.8.2 聚酰胺树脂的静态吸附单因素试验52 3.9 阿拉伯半乳聚糖的分级纯化52-55 3.9.1 DEAE-纤维素(OH~-)色谱柱对阿拉伯半乳聚糖的分级结果53 3.9.2 SephadexG-75凝胶色谱柱对LAG-1和LAG-2的分离纯化结果53-54 3.9.3 LAG-1b纯度初步鉴定结果54-55 3.10 阿拉伯半乳聚糖的分子量测定结果55-58 3.10.1 多糖分子量标准曲线的绘制55-56 3.10.2 LAG-1a、LAG-1b、LAG-2a的分子量测定结果56-58 3.11 阿拉伯半乳聚糖部分理化性质的测定结果58-59 3.11.1 阿拉伯半乳聚糖的物理性质58 3.11.2 阿拉伯半乳聚糖的化学性质58 3.11.3 阿拉伯半乳聚糖的比旋光度的测定结果58-59 3.12 阿拉伯半乳聚糖的结构略论59-67 3.12.1 阿拉伯半乳聚糖的单糖组成测定结果59-60 3.12.2 阿拉伯半乳聚糖的紫外光谱略论60-62 3.12.3 阿拉伯半乳聚糖的红外光谱略论62-64 3.12.4 碘-碘化钾反应64-65 3.12.5 刚果实验结果65-67 3.13 阿拉伯半乳聚糖的体外抗氧化测定结果67-70 3.13.1 还原力的测定结果67-68 3.13.2 清除羟自由基(·OH)能力的测定结果68 3.13.3 清除DPPH·自由基能力的测定结果68-70 4 结论70-72 5 展望72-73 6 参考文献73-79 7 攻读期间论文情况79-80 ，阿拉伯语论文，阿拉伯语论文范文 |
