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【摘要】：泰乐菌素、泰万菌素和替米考星是大环内酯类抗生素,在兽医临床上被广泛用于治疗畜禽支原体和革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性菌所引起的感染性疾病。然而当过量或不当使用这些抗生素时,会造成药物在食品动物中的残留。抗生素及其代谢产物在动物组织和器官内蓄积达到一定浓度,可对前庭和耳蜗神经造成损害,导致眩晕和听力减退,甚至会造成对肝、肾和造血系统的严重损害。
本探讨的目的是针对泰乐菌素、泰万菌素和替米考星这三种大环内酯类动物专用抗生素,建立其在动物性食品中提取、分离和检测的反相高效液相色谱法。1.探讨了在等度洗脱条件下,泰乐菌素、泰万菌素和替米考星同步分离检测的HPLC-UV略论措施。通过考察色谱柱、柱温、流动相组成、流速等色谱略论条件对泰乐菌素、泰万菌素和替米考星标准品的保留时间及分离检测结果的作用,优化了色谱略论条件,建立了一种反相高效液相色谱法同步检测泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的略论检测措施。最终选择的优化的色谱条件为Agilent SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温为30℃,流动相为乙腈-甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵溶液=45：40：15(v：v：v),检测波长为280nm,流速为1.OmL/min,运行时间15min。3种药物浓度在0.5-25μg/mL的范围内,峰面积与质量浓度呈现良好的线性关系(相关系数r0.9990),此措施的最低检测限为0.25μg/mL,最低定量限均为0.5μg/mL,同内和同间变异系数均小于5%。
2.探讨了牛奶、鸡蛋和猪肉中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的提取、净化、富集浓缩等样品前处理措施。从提取溶剂、固相萃取柱、淋洗液与洗脱液、洗脱液用量等方面对动物性食品中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的提取、净化进行了略论,最终确定了以乙腈为提取剂,选用ProElut C18固相萃耿柱净化生物样品,选定5%乙腈水为淋洗液,乙腈为洗脱液,洗脱液的体积为6mL。在本试验建立的色谱检测措施下,牛奶、鸡蛋和猪肉中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的平均回收率为63.81～84.71%,最低检测限均为20μg/Kg,最低定量限均为25μg/Kg。此措施的日内变异系数小于5%,日间变异系数小于10%。
【关键词】：提取 净化 分离 检测 药物残留
摘要7-8 Abstract8-10 縮略语表10-11 1 前言11-27 1.1 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星概况11-15 1.1.1 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的理化性质11-12 1.1.2 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的药理影响12-13 1.1.3 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的抗菌影响机制和耐药机制13-14 1.1.4 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的代谢与残留14-15 1.2 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星略论检测技术15-21 1.2.1 微生物效价法15-16 1.2.2 免疫测定法16 1.2.3 薄层色谱法(TLC)16-17 1.2.4 毛细管电泳法(CE)17 1.2.5 气相色谱-质谱联用法(GC-MS)17-18 1.2.6 高效液相色谱法(HPLC)18-19 1.2.7 高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)或高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS-MS)19-20 1.2.8 超高效液相色谱(UPLC)20-21 1.2.9 表面等离子体共振技术21 1.3 样品前处理措施21-26 1.3.1 提取溶剂22-23 1.3.2 液液萃取(LLE)23 1.3.3 固相萃取(SPE)23-25 1.3.4 在线净化25 1.3.5 加压液体萃取(PLE)25-26 1.3.6 液相微萃取(LPME)26 1.4 探讨内容和目的26-27 1.4.1 探讨内容26 1.4.2 探讨目的26-27 2 泰乐菌素、泰万菌素和替米考星略论措施的建立27-34 2.1 试验材料27-28 2.1.1 仪器设备27-28 2.1.2 药品与试剂28 2.2 试验措施28-29 2.2.1 所需试液的配制28-29 2.2.2 色谱条件29 2.2.3 标准曲线的绘制29 2.2.4 措施学的验证29 2.2.5 灵敏度(检测限和定量限)的确定29 2.3 结果29-30 2.3.1 泰乐菌素、替米考星、泰万菌素的色谱行为29-30 2.3.2 标准曲线及线性范围30 2.3.3 措施学的验证结果30 2.3.4 灵敏度(检测限和定量限)30 2.4 讨论30-33 2.4.1 色谱柱的选择30-31 2.4.2 柱温的选择31-32 2.4.3 流动相的选择和优化32 2.4.4 流速的选择32-33 2.5 本章小结33-34 3 动物性食品中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星残留检测34-46 3.1 实验材料36-37 3.1.1 仪器设备36 3.1.2 药品与试剂36-37 3.1.3 试验样品37 3.2 试验措施37-40 3.2.1 所需试液的配制37 3.2.2 样品提取措施37-38 3.2.3 样品净化措施38 3.2.4 色谱条件38 3.2.5 回收率的考察38-39 3.2.6 变异系数的考察39 3.2.7 灵敏度(检测限和定量限)的确定39-40 3.3 结果40-41 3.3.1 回收率和变异系数40-41 3.3.2 灵敏度(检测限和定量限)41 3.4 讨论41-45 3.4.1 提取溶剂的选择41-42 3.4.2 固相萃取柱的选择42-43 3.4.3 淋洗液与洗脱液的选择和优化43-44 3.4.4 洗脱液用量的选择和优化44-45 3.4.5 样品提取和净化时应注意的操作45 3.5 本章小结45-46 4. 结论46-47 4.1 建立了泰乐菌素、泰万菌素和替米考星标准品同步检测的高效液相色谱法46 4.2 建立了牛奶、鸡蛋和猪肉中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的样品前处理措施并进行了测定46-47 参考文献47-56 致谢56-57 附录57-61 附录1 标准工作曲线57-59 附录2 标准品色谱图59-60 附录3 空白样品及加标样品色谱图60-61 ，泰语论文网站，泰语毕业论文 |
