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【摘要】：
根结线虫(Meloidogyne spp．)为植物根系内寄生物，可对农作物造成严重的危害。在中国目前已报道的根结线虫有效种为39种，而西班牙根结线虫(Meloidogyne hispanica Hirschmann，西语论文网站，1986)近期已于海南省被首次发现。为了评估该线虫的潜在经济危害性，以及提供控制其传播扩散的有效实用手段，对源自海南省的西班牙根结线虫群体的同工酶、寄主范围、mtDNA及rDNA位点的特征和IGS2-RFLP检测措施进行了探讨。
对2个代表性西班牙根结线虫群体在7种常见经济作物11个品种上的繁殖力进行了测试。结果显示番茄为西班牙根结线虫的高度适宜寄主，西瓜、大豆为低度适宜寄主，辣椒、花生、棉花为非寄主。寄主范围的测试结果表明西班牙根结线虫是一种具有潜在危害性的农作物病原物。
对西班牙根结线虫与其它常见根结线虫在mtDNA和rDNA位点的核酸序列的差异进行了比较略论。西班牙根结线虫的mtDNA的COII-lrRNA基因间隔区的扩增产物约1.8 kb，与南方根结线虫(M．incognita)和爪哇根结线虫(M．javanica)的扩增产物大小相同；西班牙根结线虫的rDNA的ITS区和IGS2区的扩增产物分别约760和710bp，与4个常见种的扩增产物大小相似。rDNA-ITS序列比较略论揭示，西班牙根结线虫与南方、爪哇、花生和北方根结线虫的ITS序列的同源性分别为99.69％，西语论文网站，99.38％，99.85％和82.03％。rDNA-IGS2序列比较略论显示，西班牙根结线虫与南方、爪哇、花生和北方根结线虫的IGS2序列同源性分别为93.31％，93.75％，94.32％和57.01％。
研制了西班牙根结线虫的快速分子检测措施。该措施利用选择限制性内切酶TaqI对IGS2区的PCR扩增产物进行酶切，获得了西班牙根结线虫的554bp的特异性条带。通过对4种常见根结线虫单条线虫的测试，验证了其可靠性。本措施具有快速、灵敏的特点，可用于西班牙根结线虫单条线虫的直接鉴定。
【关键词】：西班牙根结线虫 同工酶 寄主范围 mtDNA rDNA-ITS rDNA-IGS2 IGS2-RFLP检测法
摘要6-7 Abstract7-9 上篇 文献综述9-29 第一章 根结线虫的分布、危害和防治10-19 1 根结线虫的分布10-11 2 根结线虫的危害11-13 3 根结线虫病抗病育种及抗线虫基因工程13-14 4 根结线虫病的防治14-19 第二章 根结线虫的种类鉴定和检测措施19-29 1 根结线虫的传统鉴定和检测措施19-22 (1) 形态学措施19-21 (2) 鉴别寄主实验21 (3) 同工酶表型略论21-22 2 根结线虫的分子生物学鉴定和检测措施22-29 (1) 基因组DNA—RFLP略论措施23 (2) DNA探针23-24 (3) rDNA—PCR—RFLP措施24-26 (4) mtDNA-PCR-RFLP措施26 (5) RAPD和SCAR措施26-29 下篇 探讨内容29-49 第一章 西班牙根结线虫群体的形态和同工酶鉴定及其寄主范围的测试30-37 1 材料与措施31-32 1.1 线虫群体31 1.2 线虫的杀死、固定和测计31 1.3 雌虫会阴花纹形态的观察31 1.4 同工酶略论31-32 1.5 寄主范围测试32 2 结果32-36 2.1 形态鉴定32-34 2.2 同工酶鉴定34-35 2.3 寄主范围测试35-36 3 讨论36-37 第二章 西班牙根结线虫与其它常见根结线虫在mtDNA和rDNA位点的比较略论37-45 1 材料与措施38-42 1.1 供试线虫群体38-39 1.2 DNA准备39-40 1.3 mtDNA-PCR40 1.4 rDNA的ITS和IGS2区域PCR扩增40-42 2 结果42-44 2.1 mtDNA扩增片段比较略论42-43 2.2 rDNA-ITS扩增片段和同源性比较略论43 2.3 rDNA-IGS2扩增片段和同源性比较略论43-44 3 讨论44-45 第三章 西班牙根结线虫IGS2-RFLP分子检测措施的探讨45-49 1 材料与措施46-47 1.1 供试线虫群体46 1.2 DNA准备46 1.3 IGS2-RFLP分子检测措施46-47 2 结果47 3 讨论47-49 |
